百合的組織培養(yǎng)

第一節(jié)快速繁殖

一．外植體的選擇與消毒

（一） 外植體

百合鱗片、鱗莖盤、球莖、葉片和花器官（花蕾、花絲）、種子（胚）和根等，都可以用作外植體，分化出苗。外植體應從健壯、無病毒的百合植株上采取，然后進行消毒處理、培養(yǎng)時可切割成5-8mm左右的小塊或切斷。

（二） 外植體的消毒

優(yōu)選生長健壯、開花性狀好的種球作為外植體。在取材前，做好將準備接種的鱗莖在4-5℃的低溫下處理6-8周。

鱗莖→洗衣粉常規(guī)清洗→剝去鱗莖外皮及外部2-3層鱗片，切取少許頂部及基部→用70%酒精消毒30-60s→飽和漂白粉上清液或0.1%升汞滅菌10-20min→無菌水沖洗4-8次→切塊接種。

花器官培養(yǎng)時，常取未開放的花蕾。

花蕾→用70%酒精消毒30-60s→0.1升汞滅菌15min→無菌水沖洗3-5次→切開，用鑷子取出幼嫩花瓣，未成熟的子房、帶花絲的花藥等花器官→接種。

二．培養(yǎng)過程

（一） 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

一般用MS標準培養(yǎng)基。蔗糖3%，按需要加各種激素。溫度20-25℃，光強800-1500lx，光照9-14h/d,培養(yǎng)基PH值5.6-5.8

（二） 誘導培養(yǎng)基

1.   無菌種子播種用1/2MS培養(yǎng)基不加任何激素即可

2.   鱗片培養(yǎng)鱗片切塊→接種于MS+BA0.1-1+NAA0.1-1.0→5d鱗片周圍開始膨大→10d切口處出現(xiàn)白色小鱗狀凸起→15d左右長出綠葉及小鱗莖。

3.   在高NAA低BA培養(yǎng)基上可一次性形成植株，但幼苗根部有腫脹現(xiàn)像。相反高BA低NAA時形成大量小鱗莖凸起，從中分化出芽而無根。這樣的苗可以轉入生根培養(yǎng)基上（MS+IAA1+BA0.2或用NAA代替IAA）

4.   花柱和珠芽接種于MS+IAA1+BA0.2培養(yǎng)基上，可以直接分化出芽。若接種與MS+BA0.5-1.0+NAA0.3-1.0培養(yǎng)基上，一般先出現(xiàn)愈傷組織，然后從愈傷組織再分化帶有小鱗莖的幼芽，在花器官中以花絲為材料，優(yōu)于花柱合子房。

5.   根根切成小段接種在MS+BA0.5-1.0培養(yǎng)基上，形成腫脹的粗跟，再將其切成小段，轉到MS+BA0.2的培養(yǎng)基便能分化出苗。經過5-6個月后，能形成直徑17mm左右的鱗莖，經移栽成活情況良好，一些品種移栽后1年多即開出大而美麗的花朵。

6.   莖尖或莖段接種在MS+BA0.5-3+NAA0.1-2培養(yǎng)基→20d基部萌發(fā)6-10個側芽→30d后發(fā)育為長度2-3min無根苗芽。實驗結果表明，BA與NAA有利于叢生芽誘導，其中以BA2+NAA0.1-0.2效果最好。

7.   胚培養(yǎng)在雜交育種中，為防止雜種胚與母本胚乳間不親和，有可能造成敗育的情況下，可采取胚培養(yǎng)，以克服不親和現(xiàn)象，有利于育種工作順利進行。

8.   葉片接種在MS+BA2+NAA0.2培養(yǎng)基。

（三） 繼代培養(yǎng)

將從各種外植體上誘導的小鱗莖，轉接到MS+BA1-2+NAA0.1-0.5培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)。在生長素濃度一定的情況下，隨著BA濃度的增高，增值倍數(shù)趨于平緩，而且小鱗莖細小。所以，適當降低BA的濃度有利于小鱗莖的繼代培養(yǎng)。

（四） 生根培養(yǎng)

將長2-3cm的無根苗切下，除去愈傷組織，接種到MS+NAA0.3-0.5（或IBA0.1-0.5）或1/2MS+IBA0.5+0.5%AC上培養(yǎng)，一般半個月左右就可張根。

（五） 馴化移栽

試管小鱗莖形成后，先在室內進行5-7d的馴化培養(yǎng)，然后取出小鱗莖，清洗培養(yǎng)基。將小鱗莖移栽至疏松的基質（可用園土：腐殖土：鋸末=1:1:1，或蛭石，珍珠巖））上，加強水肥管理。保持相對濕度75%，自然光50%。當有3-4片真葉長出時，可以定值，一般一個月內正常出芽，一年內能長長開花。若將小鱗莖埋藏于濕沙并冷藏，則小鱗莖進入休眠狀態(tài)，能儲藏較長時間。

百合的組織培養(yǎng)，一點見解，望見笑。